Crear experiencias positivas en Educación Física es uno de los aspectos clave para favorecer la educación de relaciones interpersonales. Este estudio examinó el efecto de las situaciones motrices de expresión cooperativa (SMEC) sobre los estados de ánimo (EA) de universitarios al participar en grupos segregados y mixtos. Participaron 81 alumnos (22 chicas y 59 chicos) del grado en Ciencias de la Actividad Física y el Deporte (INEFC Barcelona). Al inicio y final de cada sesión los participantes cumplimentaron el cuestionario POMS. El análisis estadístico mediante ecuaciones de estimación generalizadas mostró que en ambos grupos se mejoró el EA de los participantes. Los valores de tensión-ansiedad, depresión-abatimiento fueron más favorables en los grupos mixtos, mientras que puntuación global, vigor-actividad, fatigainmovilidad fueron superiores en los grupos segregados. Los hallazgos confirman la contribución de las SMEC para la creación de ambientes positivos y la mejora de la convivencia en y entre ambos géneros.